高效液相色谱法检测保健食品中肉碱的含量要怎么检测

高效液相色谱法检测保健食品中肉碱的含量

1范围

建立了高效液相色谱法测定保健食品中肉碱含量的方法。

本法适用于以肉碱为主要原料的保健食品中肉碱的测定。

2原理

用0.5mmol/l盐酸溶液超声提取样品中的肉碱，用反相高效液相色谱法分离。标准样品的保留时间是定性的，外部标准方法是定量的。

3试剂和材料

注：除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

3.1 试剂

3.1.1 磷酸氢二钾（K2HPO4）。

3.1.2辛烷磺酸钠(C8H19NaO3S)。

3.1.3 盐酸（HCl）。

3.1.4磷酸（H3PO4）。

3.1.5硅藻土（SiO2）：化学纯。

3.1.6乙腈(C2H3N)：色谱纯度。

3.2 试剂配制

3.2.1盐酸溶液（0.50 mmol/L）：吸收4.2 ml盐酸，用水稀释，体积为100 ml。然后取1mL上述溶液，用水稀释，定容至1L·L~(-1)。

3.2.2缓冲液：分别称取磷酸氢二钾8.7g，辛烷磺酸钠0.4325g，溶于水，稀释至1L，用磷酸调节至pH 2.5。

3.3 标准品

肉碱（C7H15NO3）：纯度≥98%或经国家认证认可的标准物质..

3.4 标准溶液配制

3.4.1肉碱标准储备液（1.0 mg/ml）：肉碱标准品25 mg（精确至0.1 mg）精密称取25 ml容量瓶中，溶于盐酸溶液中，定容至刻度，摇匀。

3.4.2肉碱标准工作液：标准肉碱标准保留液在5 mL瓶中，用盐酸稀释至规模化，经0.50 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL准确吸收，得到0.10 mg/mL、0.20 mg/mL、0.40 mg/mL、0.60 mg/mL、0.80 mg/mL、1.0mg/mL的标准工作液。

4仪器

4.1高效液相色谱法：配备紫外检测器或二极管阵列检测器。

4.2平衡：灵敏度为0.1mg和0.01mg

4.3 超声波提取器。

5分析步骤

5.1 试样制备

5.1.1 试样处理

5.1.1.1 固体试样

样品粉碎混合均匀称取0.1g~2g（精确至0.001g）（含待测组分约5mg~50mg）。将盐酸溶液加入50ml容量瓶中，超声提取10min，冷却，用盐酸溶液稀释至刻度，混匀，过滤，计数一次滤液毫升数，收集滤液，经0.45um水相膜过滤，取连续滤液进行检测。

5.1.1.2 软胶囊试样

样品被切开、挤压和混合，重量为0.1g≤2g(精确到0.001g)，加入相同量的硅藻土，进行均匀分散研究，并说其中一部分(精确到0.001g，约5 mg~50 mg)，被测组分用塞状三角瓶转移到250 ml，吸收盐酸溶液50 ml，加入三角瓶，称重，填充超声萃取10 min，冷却，与盐酸溶液混合，在毫升中丢弃初始滤液，收集滤液，经过0.45μm的水相滤膜，取滤液进行测量。

5.1.1.3 液体试样

精密测量：1毫升～5毫升（含约5毫克～50毫克的待测组分），35毫升盐酸溶液加入50毫升容量瓶，超声提取10分钟，冷却，用盐酸溶液稀释，混合，过滤，丢弃一级滤液毫升，收集滤液，通过0.45微米水相滤膜，取连续滤液进行测定。

5.1.2 稀释

根据样品中肉碱的含量，将溶液中的肉碱稀释至0.10mg/mL~1.0mg/mL。用盐酸溶液。

5.2 色谱参考条件

5.2.1柱：C18柱：4.6*250 mm，5微米或同性能柱。

5.2.2流动相：缓冲溶液90 10。

5.2.3流量：0.8ml/min。

5.2.4 检测波长：210nm。

5.2.5 进样量：20μL。

5.3 标准曲线的制作

将肉碱标准工作液(3.4.2)分别从低浓度到高浓度注入高效液相色谱(HPLC)中，并测定相应的峰面积。以标准工作液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线

5.4待测溶液的测定

在相同的色谱条件下，将待测液（5.1.1.1，5.1.1.2，5.1.1.3，5.2.1）注入高效液相色谱法按保留时间定性测定峰面积，按标准曲线计算待测溶液中肉碱的浓度

6 分析结果的表述

试样中肉碱含量按式（1）计算：

X—固体样品中肉碱含量为g/100g，液体样品中肉碱含量为g/100ml。

根据每毫升毫克标准曲线(毫克/毫升)计算待测溶液中肉碱的浓度。

V—试样的稀释体积，单位为毫升（ml）；

M/L-取样质量，以克(G)为单位；抽样量，以毫升(毫升)为单位；

F——稀释倍数；

100——单位转换；

1000——单位转换。

OneDrive 个人保管库是什么，微软推出的用意是什么。

今年6月份，微软宣布推出 OneDrive 个人保管库，这是即将引入 OneDrive 个人帐户的全新安全层，可进一步保护最敏感和最重要的文件。这项新功能将在年底前向所有人开放。

OneDrive在受信任的Microsoft云上运行，其中有众多安全措施来确保文件安全。但我们知道有些人希望其最重要和最敏感的文件获得更多保护，这就是微软推出个人保管库的原因。

个人保管库是OneDrive中受保护的区域，只能通过强身份验证方法或身份验证的第二步进行访问，例如通过指纹、人脸、PIN或通过电子邮件/短信发送的代码访问。在个人保管库中锁定的文件具有额外的安全保障，可在有人获取对你的帐户或设备的访问权限时确保文件更加安全。

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新生儿肉碱可以通过新生儿筛查进行检查，其中新生儿的唯一血液主要用于检查。一旦肉碱值低，这种情况需要及时治疗。由于新生儿肉碱含量相对较低，可引起一系列异常。对于新生儿，低肉碱很容易引起低血糖，呕吐和其他异常。

(1)氯氮革、马来酸咪达唑仑、硝西泮、艾司唑仑、奥沙西泮、阿普唑仑、劳拉西泮、氯硝西泮、三唑仑、地西泮。

①色谱条件以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈一0．01mol/L磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾1．36g，加水适量溶解至1000mL)(28：72)用磷酸调pH为2．5±O．1为流动相，检测波长230nm(如有与对照品保留时间一致的色谱峰，用DAD检测)。

②对照品和供试品的制备 取氯氮革、马来酸咪达唑仑、硝西泮、艾司唑仑、奥沙西泮、阿普唑仑、劳拉西泮、氯硝西泮、三唑仑和地西泮对照品10mg，分别置25mL容量瓶中。加甲醇至刻度，作为对照品贮备液；分别精密量取上述对照品贮备液1．00mL置25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，作为对照品溶液。取一次服用剂量的供试品，研细，加三氯甲烷约30mL，超声处理20min，放冷，过滤，滤液蒸干，残渣用甲醇25mL溶解，摇匀。过滤，取续滤液作为供试品溶液。

③测试分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。

④结果判断供试品高效液相色谱中，应不得检出与氯氮革、马来酸咪达唑仑、硝西泮、艾司唑仑、奥沙西泮、阿普唑仑、劳拉西泮、氯硝西泮、三唑仑和地西泮对照品保留时间一致的色谱峰。

(2)巴比妥、司可巴比妥钠、异戊巴比妥、苯巴比妥、氯美扎酮。

①色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；必乙腈O．2％乙酸(25：75)为流动相，检测波长210nm(如有与对照品保留时间一致的色谱峰，用DAD检测)。

②对照品和供试品的制备取巴比妥、司可巴比妥钠、异戊巴比妥、苯巴比妥和氯美扎酮对照品10mg，分别置25mL容量瓶中，加甲醇至刻度．作为对照品贮备液；分别精密量取上述对照品贮备液1．00mL置25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，作为对照品溶液。取相当于一次口服剂量四分之一的供试品，研细，加甲醇100mL．强力振摇1min，静置片刻，取上清液，用O．45μm滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

③测试分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。

④结果判断供试品高效液相色谱中，应不得检出与巴比妥、司可巴比妥钠、异戊巴比妥、苯巴比妥和氯美扎酮对照品保留时间一致的色谱峰。

注：本方法以食药监办许[2010]114号《关于印发保健食品安全风险监测有关检测目录和检测方法的通知》为依据．采用薄层色谱法和高效液相色谱法建立的安神类保健食品违法添加药物的检测方法操作规程。