如何用标记基因检测目的基因导入载体?

2024年11月16日 12:40
有3个网友回答
网友(1):

一般标记基因的DNA序列是已知的,若选用抗氨苄青霉素基因,则可在目的基因导入后用氨苄青霉素来处陵梁理受体细胞,若无异常,则抗氨苄青霉素已合成,说明基因已得到表达。
标记基因的作用在于便于检测目的基因的情况。因为标记基因和目的基因同位于运载体上,要导入都导入,要表达亏尘则都会表达。
检测分三种,首先是通过对标记基因的检测,通常用DNA分子杂交技术,来检验标记基因是否成功的导入受体细胞。或者用分子杂交技术,来看目的基因导入后是否成功转录出信使RNA。最后可以用抗原-抗体检验,来验证导入基因是否成功表达。
扩展资料
标记基因就是在导入受体细胞时导入进取的人类的已知作用尺空运的基因,目的是为检测目的基因是否成功导入。由于一般都是有"鸟枪法"导入的目的基因,所以成功率并不是很高,目的基因的检测和筛选就显得很有必要。例如:
大肠杆菌的某种质粒具有青霉素抗性基因,当这种质粒与外源DNA组合在一起形成重组质粒,并被转入受体细胞后,就可以根据受体是否吸饱具有青霉素抗性来判断受体细胞是否获得了目的基因。
当含有青霉素的培养基来培养受体细胞时,能够在培养基中存活下来的受体细胞就可以认为是成功的导入了外源DNA,标记基因就起作用了。
参考资料来源:百度百科-基因标记
参考资料来源:百度百科-目的基因的检测与鉴定

网友(2):

将标记基因和目的基因偶联在一起,肆笑如果能在转化后的细胞或细菌中检测到标记基因的表达,就可以认定目的基因已导入到受体陆雹兄宿主中。标记基因如耐药基早袭因、绿色荧光蛋白基因等都可以成为标记基因。

网友(3):

筛选过程举例说明如下:


一、问题背景:

有一个质粒载体,有两个标记基因:氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因。

现用某种限制酶分别切割质粒和含目的基因的DNA后混合,再加入DNA连接酶,用得到的混合物直接转化大肠杆菌,结果:大肠杆菌有的未被转化,有的被转化。

转化的大肠杆菌有三种,分别是含有环状目的基因(首尾黏性末端相同导致自身环化)、含有质闷核猛粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。

目的基因插入的位置是四环素抗性基因,四环素抗性基因失活。


二、筛选过程

第一步 :用含蚂桥有氨苄青霉素的培养基筛选:未转化和仅含环状目的基因氏者的大肠杆菌都不能生长,原因是两者均不含氨苄青霉素抗性基因。含有质粒载体和含有重组质粒的大肠杆菌都能生长,原因是两者均含有氨苄青霉素抗性基因。

第二步:用含有四环素的培养基筛选:在第一步筛选的基础上,将获得的单个菌落各挑取少许分别接种到含有四环素的培养基上,不能生长的为要筛选的菌落,即含有重组质粒的大肠杆菌,原因是质粒载体有四环素抗性基因,重组质粒的四环素抗性基因由于目的基因插入而失活。


资料素材来源:2016年全国卷1高考生物。