求一中英文对照文献

The extraction of genomic DNA is usually used to construct genome library, hybrid united (including RFLP) and polymerase chain reaction (PCR) isolated gene etc. Use of genomic DNA longer characteristics, can become its and organelles or plasmid DNA molecules such as small separation. Add a certain amount of isopropyl alcohol or ethanol, genome macromolecules DNA, or precipitation form fibrous flocculent mass of glass rod, floating can take out his small molecules, and DNA is to form a granular precipitation attached to wall and bottom, so as to achieve the purpose of extraction. In the extraction process, dyeing machinery fault occurred, produce experience of different size, so the separate genomic DNA fragments should be as far as possible in mild conditions, such as operation to reduce as far as possible phenolic/chloroform extraction, blending process should be light slow, to ensure that get longer DNA. Generally speaking, the construction of the library, the initial DNA genome length must in 100 KB above, or enzyme cut both sides with right after the end of the little pieces. Effective By RFLP and polymerase chain reaction (PCR) analysis, DNA length can be short to 50 KB, in the length above, can ensure the enzyme cut the generation after footage (RFLP 20 KB below), and can ensure that contains the footage (PCR amplification of general 2 KB below). Different biological (plant, animal, microbial) of the extraction methods of genomic DNA were different. Different kinds or the same kinds of different organizations because its cellular structure and contain of different components, separation methods are also different. In a special organization DNA extracted must refer to the literature and experience establish corresponding extraction method to get the DNA molecules can 基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交(包括RFLP)及PCR分离基因等。利用基因组DNA较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。加入一定量的异丙醇或乙醇，基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出，而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部, 从而达到提取的目的。在提取过程中,染色体会发生机械断裂,产生大小不同的片段,因此分离基因组DNA时应尽量在温和的条件下操作,如尽量减少酚/氯仿抽提、混匀过程要轻缓, 以保证得到较长的DNA。一般来说,构建基因组文库, 初始DNA长度必须在100kb以上,否则酶切后两边都带合适末端的有效片段很少。而进行RFLP和PCR分析, DNA长度可短至50kb, 在该长度以上,可保证酶切后产生RFLP片段(20kb以下),并可保证包含PCR所扩增的片段(一般2kb以下)。
不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方法有所不同; 不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法, 以获得可用的DNA大分子。尤其是组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的抑制作用,因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时, 应考虑除去多糖和酚类物质。
二，材料、设备及试剂一、材料
哺乳动物新鲜组织。
二、设备
移液管、高速冷冻离心机、台式离心机、水浴锅。
三、试剂
1、分离缓冲液：10mmol/L Tris�6�1Cl pH7.4, 10mmol/L NaCl, 25mmol/L EDTA。
2、其它试剂：10% SDS，蛋白酶 K (20mg/ml或粉剂)，乙醚，酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)，无水乙醇及70%乙醇，5mol/L NaCl，3mol/L NaAc，TE。 三，操作步骤1. 切取组织5g左右,剔除结缔组织,吸水纸吸干血液,剪碎放入研钵(越细越好)。
2. 倒入液氮,磨成粉末,加10ml分离缓冲液。
3. 加1ml 10% SDS, 混匀,此时样品变得很粘稠。
4. 加50ul或1mg 蛋白酶 K, 37℃保温1-2小时, 直到组织完全解体。
5. 加1ml 5mol/L NaCl, 混匀,5000rpm离心数秒钟。
6.取上清液于新离心管，用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提。待分层后,3000rpm离心 5分钟。
7. 取上层水相至干净离心管, 加2倍体积乙醚抽提(在通风情况下操作)。
8. 移去上层乙醚,保留下层水相。
9. 加1/10 体积3mol/L NaAc, 及2倍体积无水乙醇颠倒混合沉淀DNA。室温下静止10-20分钟，DNA沉淀形成白色絮状物。
10. 用玻棒钩出DNA沉淀,70%乙醇中漂洗后,在吸水纸上吸干,溶解于1ml TE中,-20℃保存。
11. 如果DNA溶液中有不溶解颗粒,可在5000rpm短暂离心,取上清; 如要除去其中的RNA,可加5μl RNaseA(10μg/μl), 37℃保温30分钟, 用酚抽提后, 按步骤9-10重沉淀DNA。
12. DNA溶液稀释20-30倍后,测定OD260 /OD280 比值, 明确DNA的含量和质量。
取2-5μl 在0.7% agarose胶上电泳, 检测DNA的分子大小。
另外，取2μg DNA, 用10单位(U)HindⅢ酶切过夜, 0.7% agarose胶上电泳, 检测能否完全酶解(做RFLP, DNA必须完全酶解)。
如果DNA中所含杂质多, 不能完全酶切, 或小分子DNA多, 影响接续的分析和操作,可以用下列方法处理：
（1）选用幼嫩植物组织，可减少淀粉类的含量。
（2） 酚:氯仿抽提, 去除蛋白质和多糖。
（3）Sepharose柱过滤, 去除酚类、多糖和小分子DNA。
（4）CsCl梯度离心, 去除杂质, 分离大片段DNA(可用作文库构建)。