这种情况是很常见的，通常只有第一次PCR的产物质量非常高的情况下才能不稀释直接作为第二次PCR的模板还有好的效果，况且第一轮PCR的产物中会有很多不需要的组分，因此第一轮的产物通常都要进行稀释后作为第二轮的模板，稀释100倍是起步，另外你的PCR体系模板量太大了，10%的模板是很多的，会引入大量第一次PCR的杂质，一般加1~2微升即可。另外第二轮PCR通常设计的引物退火温度要大于第一轮比较好
A根本没P出来呗 那个条带就是你加进去的模板 模板浓度太高了 光是模板跑胶的亮度跟你目的条带扩增出来的都一样了
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