氧化应激指标的常用检测方法?

氧化应激的定量评价方法大致分做三类：

1）测定由活性氧修饰的化合物；

2）测定活性氧消除系统酶和抗氧化物质的量；

3）测定含有转录因子的氧化应激指示物。

进一步尚有：

1）生物体内氧化应激的程度足以产生应答；

2）活体内难以蓄积；

3）在活体内不是被代谢，而是稳定存在，等等。理解这些要点对于临床普及推广都很有用。

但在临床上，氧化应激的定量仍旧存在问题。因氧化应激与各种各样疾病均密切相关，故缺乏特异性，其量化指标难以用于特别指定的疾病。所以目前认为，当用于“全身评价”，或者在已经明确疾病原因为氧化应激后的“严重程度及予后”的评价。

扩展资料

抗氧化是预防衰老的重要步骤，因为自由基或氧化剂会将细胞和组织分解，影响代谢功能，并会引起不同的健康问题。如果能够消除过多的氧化自由基，对于许多自由基引起的及老化相关疾病都能够预防。例如常见的糖尿病、白内障、心血管病、老年痴呆等疾病都被认为与自由基相关。

抗氧化剂能在自然饮食中找到，是被称为三大抗氧化物质的维生素E、维生素C、和β-胡萝卜素。他们可以利用自身结构的特性来稳定自由基多余的电子，防止对细胞造成老化。豆类富含大量的膳食纤维和抗氧化剂，其中红豆和黑豆抗氧化剂最多。苹果中含有多种基本维生素和强抗氧化剂。

参考资料来源：百度百科-氧化应激

　　氧化应激(oxidative stress)是指机体或细胞内氧自由基的产生与清除失衡,导致活性氧(reactive oxygen species, ROS)和活性氮(reactive nitrogen species, RNS)在体内或细胞内蓄积而引起的氧化损伤过程。近年来研究显示，氧化应激可促进DNA损害、遗传突变等并导致肿瘤发生［1-4］。肿瘤患者普遍存在心身疾病［5-7］，但国内外有关氧化应激状态与肿瘤患者心身疾病关系的报道少见。本研究通过研究初发急性白血病患者血浆中活性氧类物质、抗氧化酶防御系统及DNA氧化损伤修复基因hOGG1的水平，对初发急性白血病患者机体抗氧化状态与抑郁情绪之间的关系做了一些初步分析。

　　材料和方法

　　临床资料

　　92例患者均为2004年3月到2005年7月在西安交通大学第二医院血液科经骨髓穿刺等检查确诊的急性白血病初发患者，其中男54例，女38例，中位年龄45（19-73）岁。按FAB病理分型：急性非淋巴细胞白血病(ANLL ) 62 例(M1 5例，M2 16例，M3 14例，M4 8例，M5 15例，M6 4例) ，急性淋巴细胞白血病(ALL) 30例(L1 14例，L2 10例，L3 6例)。92例患者在本研究前1月未曾服用抗抑郁药及抗氧化剂，心、肝、肾功能基本正常，既往无精神病史、酒精和药物依赖病史，无脑器质性疾病和内分泌疾病史，无严重认知障碍。取20名正常人外周血作正常对照，与急性白血病组间性别、年龄等资料对比差异无显著性。

　　抑郁自评

　　抑郁自评量表（self-rating depression scale，SDS）含有20个项目、四级评分。统计指标为总分，由研究者计算并判断，总分≥50表示有不同程度的抑郁症状，分数越高表示症状越重。

　　多项目问卷调查

　　多项目调查问卷包括患者的一般人口社会学资料等内容，调查遵循了伦理学、患者知情认知及医师对调查资料完全保密等原则。

　　氧化应激检测

　　用氧化应激指标检测试剂盒（由南京建成生物公司提供），按照说明书操作检测。

　　T-AOC、ROS、SOD、MDA、NO检测

　　用Fe3+还原法测定血浆总抗氧化能力（T-AOC），采用Fenton 反应及Gress 显色原理测定活性氧(ROS)，黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD），硫代巴比妥酸法(TBA)测定丙二醛(MDA)含量，硝酸还原酶法测定一氧化氮（NO）。

　　实时定量PCR检测

　　取肝素抗凝新鲜人外周血5 ml，淋巴细胞分离液［密度1 g/cm3(20℃)］分离外周血单个核细胞，加入TRIZOL(Invitrogen公司产品)，抽提总RNA。紫外吸收测定法检测RNA浓度和纯度，A 260 nm/A 280 nm比值在1.8-2.1之间。采用变性琼脂糖凝胶电泳, 紫外透射光下观察并拍照。5 μg总RNA经oligo(dT) 引物逆转录合成cDNA，逆转录反应为37℃ 1小时、95℃ 5分钟，cDNA溶液储存于-20℃备用。由上海康成生物公司合成引物，hOGG1正义引物： 5'- CCCCAGACCAACAAGGAACT-3'； 反义引物： 5'-TGGAACCCTTTCTGCGCTTT-3'，扩增片段145 bp；管家基因正义引物： 5'- CCTGTACGCCAACACAGTGC-3'；反义引物： 5'-ATACTCCTGCTTGCTGATCC-3'，扩增片断211 bp。定量阳性模板扩增曲线以hOGG1模板起始拷贝数的常用对数为横坐标，循环阈值为纵坐标，得到标准曲线，相关系数r=0.99991。荧光定量PCR反应体系25 μl： SybergreenⅠ(Invitrogen公司产品) 终浓度6.25 μl，25 mmol/L MgCl2 溶液3 μl， 20 μmol/L 的PCR特异引物各0.5 μl，Taq聚合酶3 U， dNTP混合液3 μl，cDNA 1 μl。 反应条件(Rotor-Gene3000 Realtime PCR仪): 94℃5分钟，40个循环(94℃ 10秒，58℃ 15秒，72℃ 20秒)。PCR产物与100 bp DNA Ladder在2％琼脂糖凝胶电泳，GoldViewTM染色，检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。hOGG1与β-actin绝对拷贝数之比，作为hOGG1基因的相对表达量