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如何消除PCR的拖尾

PCR扩增出来有目的条带，但是有拖尾，呈弥散片

2024年12月01日 18:27

有3个网友回答

网友（1）：

消除PCR拖尾的方法：

1、纯化模板

2、更换Buffer

3、适当提高退火温度

4、适量用酶

5、适当降低dNTP和镁离子的浓度

6、减少循环次数

PCR拖尾产生的原因：

1、模板不纯

2、Buffer不合适

3、退火温度偏低

4、酶量过多

5、dNTP、Mg 2*浓度偏高

6、循环次数过多

扩展资料

一、PCR无扩增物

（一）原因：

1、模板含有抑制物，含量低

2、Buffer对样品不合适

3、引物设计不当或者发生降解

4、反应条件:退火温度太高，延伸时间太短

（二）解决方法：

1、纯化模板或者使用试剂盒提取模板DNA或加大模板的用量

2、更换Buffer或调整浓度

3、重新设计引物(避免链间二聚体和链内二级结构)或者换一~管新引物

4、降低退火温度、延长延伸时间

参考资料来源：百度百科-PCR技术

网友（2）：

拖尾在生物专业词汇叫做smear。造成此的原因有多种。一般来讲，有以下几点：
1，引物设计不佳，造成了拖尾现象。
2，PCR中DNA浓度加的太多，造成了拖尾。
3，mg2+浓度加的太高，造成了拖尾。
4，跑胶电压不合适，造成了拖尾。
5，退火温度不合适，造成了拖尾。

这些都可能造成拖尾，请认真分析之。谢谢。

网友（3）：

跑慢点