我想你是用高保真酶扩增的，那么高保真没产物一般都没有A尾巴，但是如果想要A尾巴做TA克隆，可以直接在PCR产物上加-A，体系是（PCR回收产物，Taq酶，水，dATP，Taq PCR buffer），直接72度延伸20min即可。
如果你仍想继续以回收产物为模板，那么要先检测你的条带是否为目的基因或是否有回收到产物，如果是目的基因，那么用它做模板，浓度不需要太严格，你电泳检测一下再扩增试试。
回收率地，你用回收DNA跑个电泳看看，特暗或啥都没有。你先别回收，直接用产物扩。
那就说明这次的条带是非特异性条带呗 你怎么就确定特异性好了 不是只有一条就叫特异性好
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