由于免疫组化的蛋白一般没有变性保留着二级或三级结构,抗体较难结合,所以抗体效价需要较高,而western的蛋白都是变性的,蛋白决定簇基本暴露,所以不需要很高效价的抗体。所以抗体区别在于效价的高低,一般能用于免疫组化的基本都能用于western blot。
ELISA(酶联免疫吸附试验Enzyme linked immunosorbent assay)用到了免疫学原理和化学反应显色,待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液,因而没有用到组织包埋、切片等技术,这是与免疫组化的主要区别,操作上 开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面,从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上,这就是“吸附”的含义。
WB (蛋白质印迹Western Blot)先要进行SDS-PAGE,然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上,而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品,可以用于定性和半定量。