质粒用一种内切酶切会自连的,所以一般做克隆进来避免用单酶切。
如果没有办法,只能用单酶切,最好对质粒进行碱性磷酸酶处理,去磷,这样能够降低自连的比例,增加克隆成功的概率。
目的基因单酶切一般不会自连的。
当然会自连。如果有足够丰富的酶切位点,选择双酶切会好很多。但是以目前的技术手段,就算自连也很容易挑选克隆。
目的基因自连,转化宿主后宿主不能生长;载体自连,多数情况下可采用蓝白斑筛选,白色的是自连的,蓝色的是插入目的基因的。
通常用同种限制酶 可能自连 所以才检测
可以的用同种限制酶。…不会自连