先说搅拌,搅拌的目的是将吸附在菌体表面的噬菌体的蛋白质外壳全部与菌体分离。然后离心是将细菌沉淀下来,而噬菌体的蛋白质外壳则留在上清液中。理想情况下,离心之后,上清中存在的是噬菌体的外壳;沉淀中的是所有细菌,其中包括已注入的噬菌体的DNA。(理想情况是指:1、未吸附的噬菌体全部除去;2、吸附的噬菌体全部注入DNA;3、搅拌时,噬菌体蛋白质外壳与菌体完全脱离;4、所有细菌均无破裂。但其实这是很难达到的,所以总会有一些杂质。上清中杂质主要是未吸附的噬菌体、破裂后的细菌DNA、蛋白质等,沉淀杂质中主要是未离开细菌的噬菌体。)
如果只是搅拌而不离心,的确也能分开,但是需要的时间长,细菌会裂解。不知道你有没有注意到教科书上的原话,这个实验一定要在“短时间”保温后搅拌、离心让噬菌体和细菌分开。
搅拌和离心的目的是为了将噬菌体蛋白质外壳同侵入大肠杆菌的噬菌体DNA分开,以便对放射性元素跟踪测试。离心会使质量较轻的噬菌体颗粒进入上清液,而被感染的细菌则形成沉淀,但这必须保证是在菌体裂解之前进行。噬菌体侵染细菌的速度很快,在37度的条件下大约40分钟就可以产生100到300个子代噬菌体。从感染到释放前的这段时间叫潜伏期,大约经历20到30分钟。短时间的保温可获得足够数量的子代噬菌体,但又必须避免超出潜伏期(确保溶液分层),所以离心要在“短时间”保温后及时进行。
离心:让细菌和病毒分开。
搅拌:让侵染细菌的噬菌体的蛋白质外壳与细菌分开,噬菌体的核酸已经进入细菌。
下层:细菌。
上层:病毒。
搅拌是为了使吸附在细菌的病毒蛋白质外壳与细菌分离,同时也会使未将DNA注入细菌但位于细菌细胞膜的细菌分离.因此,搅拌时间不能过长过过短。过长子代病毒已裂解细菌,过短细菌遗传物质不能注入细菌体内,两者均影响实验结果。 ,