确实可以不一定要TA克隆。
你可以在设计引物的时候在引物的5'端加上酶切位点，比如你选中XXXYYY位点你可以把引物设计为AA－XXXYYY－AGCT(AGCT 代表你原来的引物序列）.我一般在头上加2个A，这样酶切效果好一些。两个引物可以加相同，也可以不同酶切位点。取决于2点：
1。扩增区没有该位点，（必须知道你扩增区的序列）
2。对应于你的目标分子。
TA克隆的好处在于选择灵活，万一一个位点不好使，同一批质粒还可以用其他酶再切。随时可以扩增。还有方便下游作业，比如说你要连接两端PCR产物，先克隆会比较方便一些。
所以2种方法各有优缺点，你可以根据情况选用。
TA克隆效率比较高，而且如果目的基因序列不明，那么就无法恰当的选择内切酶，所以一般TA克隆后测序，然后再用酶切。
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