一、 分光光度计及其分类
利用分光光度法或技术工作的仪器叫分光光度计,可分为如下几类:
一、 分光光度计检定(测试)的主要项目对分析结果的影响
1)波长准确度
分光光度法原理要求照射在样品池上的单色光必须对应于样品吸收光谱中的某一个吸收峰的波长。由于仪器的制造和调整误差，单色光的实际波长与仪器的波长读数值间都存在一定的误差。样品中绝大部分的主要吸收峰都有一定的宽度，对波长准确度要求允许宽些。但是，当吸收峰宽度较小，而且吸收峰两侧边缘比较陡直，此时波长准确度的影响就必须引起注意
2)透射比（吸光度）准确度
很显然,透射比或吸光度的误差越大,测试结果的可信性越差,从而影响到测试数据的准确性.
3)杂散光
杂散光是由于光学元件制造误差以及光学和机械零件表面的漫反射形成的。杂散光是分析样品的非吸收光，随着样品浓度的增加，杂散光的影响也随之增大，将给分析结果带来一定的误差。在紫外的短波区域光源强度和检测器的灵敏度均明显减弱，杂散光的影响更不能忽视。因此，杂散光的大小也是仪器性能的一项重要指标。
二、 与分光光度计正确使用和维护有关的几个注意事项
1） 若大幅度改变测试波长，需稍等片刻，等灯热平衡后，重新校正“0”和“100%”点。然后再测量。
2）指针式仪器在未接通电源时，电表的指针必须位于零刻度上。若不是这种情况，需进行机械调零。
3） 比色皿使用完毕后，请立即用蒸馏水冲洗干净，并用干净柔软的纱布将水迹擦去，以防止表面光洁度被破坏，影响比色皿的透光率。
4） 操作人员不应轻易动灯泡及反光镜灯，以免影响光效率。
5） WFZ800-DA、756型等分光光度计，由于其光电接收装置为光电倍增管，它本身的特点是放大倍数大，因而可以用于检测微弱光电信号，而不能用来检测强光。否则容易产生信号漂移，灵敏度下降。针对其上述特点，在维修、使用此类仪器时应注意不让光电倍增管长时间暴露于光下，因此在预热时，应打开比色皿盖或使用挡光杆，避免长时间照射使其性能漂移而导致工作不稳。
一、 分光光度计及其分类
利用分光光度法或技术工作的仪器叫分光光度计,可分为如下几类:
一、 分光光度计检定(测试)的主要项目对分析结果的影响
1)波长准确度
分光光度法原理要求照射在样品池上的单色光必须对应于样品吸收光谱中的某一个吸收峰的波长。由于仪器的制造和调整误差，单色光的实际波长与仪器的波长读数值间都存在一定的误差。样品中绝大部分的主要吸收峰都有一定的宽度，对波长准确度要求允许宽些。但是，当吸收峰宽度较小，而且吸收峰两侧边缘比较陡直，此时波长准确度的影响就必须引起注意。
2)透射比（吸光度）准确度
很显然,透射比或吸光度的误差越大,测试结果的可信性越差,从而影响到测试数据的准确性.
3)杂散光
杂散光是由于光学元件制造误差以及光学和机械零件表面的漫反射形成的。杂散光是分析样品的非吸收光，随着样品浓度的增加，杂散光的影响也随之增大，将给分析结果带来一定的误差。在紫外的短波区域光源强度和检测器的灵敏度均明显减弱，杂散光的影响更不能忽视。因此，杂散光的大小也是仪器性能的一项重要指标。
二、 与分光光度计正确使用和维护有关的几个注意事项
（在使用仪器前，必须仔细阅读其使用说明书）
1） 若大幅度改变测试波长，需稍等片刻，等灯热平衡后，重新校正“0”和“100%”点。然后再测量。
2）指针式仪器在未接通电源时，电表的指针必须位于零刻度上。若不是这种情况，需进行机械调零。
3） 比色皿使用完毕后，请立即用蒸馏水冲洗干净，并用干净柔软的纱布将水迹擦去，以防止表面光洁度被破坏，影响比色皿的透光率。
4） 操作人员不应轻易动灯泡及反光镜灯，以免影响光效率。
5） WFZ800-DA、756型等分光光度计，由于其光电接收装置为光电倍增管，它本身的特点是放大倍数大，因而可以用于检测微弱光电信号，而不能用来检测强光。否则容易产生信号漂移，灵敏度下降。针对其上述特点，在维修、使用此类仪器时应注意不让光电倍增管长时间暴露于光下，因此在预热时，应打开比色皿盖或使用挡光杆，避免长时间照射使其性能漂移而导致工作不稳。
6） 放大器灵敏度换挡后，必须重新调零。
7） 比色杯的配套性问题。比色杯必须配套使用，否则将使测试结果失去意义。在进行每次测试前均应进行比较。具体方法如下；分别向被测的两只杯子里注入同样的溶液，把仪器置于某一波长处，石英比色杯；220nm、700nm装蒸馏水，玻璃比色杯：700nm处装蒸馏水，将某一个池的透射比值调至100%，测量其他各池的透射比值，记录其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范围内则可以配套使用，若超出此范围应考虑其对测试结果的影响。
四、分光光度计操作中容易出现的几个典型故障及其排除方法
1） 仪器不能调零。可能原因：a）光门不能完全关闭。解决方法：修复光门部件，使其完全关闭。 b）透过率“100%”旋到底了。解决方法：重新调整“100%”旋钮。c）仪器严重受潮。解决方法：可打开光电管暗盒，用电吹风吹上一会儿使其干燥，并更换干燥剂。d）电路故障。解决方法：送修理部门，检修电路。
2） 仪器不能调“100%”。可能原因：a）光能量不够。解决方法：增加灵敏度倍率档位，或更换光源灯（尽管灯还亮）。b）比色皿架未落位。解决方法：调整比色皿架使其落位。c）光电转换部分老化。解决方法：更换部件。d）电路故障。解决方法：调修电路。
3) 测量过程中,“100%”点经常变动。可能原因：a）比色皿在比色皿架中放置的位置不一致，或其表面有液滴。解决方法：用擦镜纸擦干净比色皿表面，然后将其安放在比色槽的左边，上面用定位夹定位。b）电路故障（电压、光电接收、放大电路）。解决方法：送修。
4)数显不稳。可能原因：a）预热时间不够。解决方法：延长预热时间至30分钟左右（部分仪器由于老化等原因，长时间处于工作状态时，也会工作不稳）。b）光电管内的干燥剂失效，使微电流放大器受潮。解决方法：烘烤电路，并更换或烘烤干燥剂。c）环境振动过大、光源附近空气流速大、外界强光照射等。解决方法：改善工作环境。d）光电管、电路等其它原因。解决方法：送修。
五、提高分光光度计透射比检定及使用精度的几种 方法
在分光光度计的使用或检定中,透射比(吸光度)的准确度是衡量仪器工作性能的一项重要指标,它的准确程度直接关系到所测数据的可信性及科学性。所以提高此项指标的使用及检定准确度显得尤为重要。下面结合近年来对分光光度计的检定或修理实践,把如何提高透射比的测试及使用精度的几点方法列表叙述如下：
透射比准确度偏低的原因 相应的解决办法
(1) 通过样品池的光斑 调整光源位置,使 不居中 光斑居中
(2) 样品池架的推拉装置定 测试时反复推拉, 位不精确 (微量杯) 加强定位或修复
(3) 预热时间不够或过长 根据仪器具体情况延长或缩短预热时间
(4) 光源强度不够,使噪声 更换新的光源(尤的影响相对明显,进而影 其是紫外光源)响测试结果
(5)光电转换部分老化 更换新的光电转换装置
(6)计量检定中没有正 在计量检定中,确使用空白比色架 以空气做参比时,使用空白比色架,确保进入样品及参比的光量一致
(7)参比杯与样品杯不 使用透射比之差配套 在0.5%范围内的配套比色杯。
分光光度计关于操作误差,多数情况下,通过严格按操作程序测量、仪器调零、准确称量等来控制或减少这种误差的产生.关于仪器的系统误差,可通过对分光光度计的定期校正来克服,若所需准确度很高的测量,则必须天天校正.
1.配制60mg/L的重铬酸钾溶液
在天平上称取已干燥的重铬酸钾60mg,准确至+-0.1mg.放在烧杯中,用适量蒸馏水溶解,并加入1ml（0.1mol/L）的高氯酸.然后转移到1000ml的容量瓶中,在蒸馏水稀释至刻度.
2.浓度为60mg/L的重铬酸钾溶液在各温度下的投射比（光谱宽度为2nm）
波长235350（nm）温度（℃）
1018.022.6
1518.022.7
2018.122.8
2518.222.9
3018.322.9
3.要有可见中性虑光片（其透过比为10%,20%,30%准确度优于+-0.2%）
4.要有投射比配对误差不打鱼0.1%的石英吸收池一对
5.投射比准确度+-0.5%,重复度+-0.5%
6.光谱宽度为2nm,按要求校正仪器零点.高氯酸盛于10mm厚的石英吸收池中,调投射比为100%,将经标定过的重铬酸钾盛于另一石英吸收池中,置于光浴,按步骤2提供的数据每个波长测试三遍,三次平均值与标准值之差为其可见光区透射比的准确度.三次测量的最大值和最小值之差为可见光区的重复性.
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